An object of the present invention is to provide a method for efficiently preparing dental pulp stem cells from dental pulp cells collected from dental pulp tissue. A method for preparing dental pulp stem cells from dental pulp cells collected from dental pulp tissue according to the present invention comprises (a) using pulp culture medium containing serum at 7 to 13% (V / V). A step of culturing, wherein the dental pulp cells are adhered on the culture dish, and (b) the dental pulp cells adhered on the culture dish in the step (a) contain 7 to 13% (V / V) of serum. A method for preparing dental pulp stem cells, comprising: culturing at least one day using a culture solution; and (c) culturing the dental pulp cells in a low serum state after the step (b). [Selection figure] None【課題】 本発明は、歯髄組織より採取した歯髄細胞から歯髄幹細胞を効率的に調製する方法の提供を課題とする。【解決手段】 本発明に係る歯髄組織より採取した歯髄細胞から歯髄幹細胞を調製する方法は、(a)歯髄細胞を、7~13% (V/V)で血清を含む培養液を用いて前培養する工程であって、歯髄細胞を培養ディッシュ上に付着させる工程と、(b)工程(a)により培養ディッシュ上に付着した歯髄細胞を、7~13% (V/V)で血清を含む培養液を用いて少なくとも1日培養する工程と、(c)前記工程(b)の後に、前記歯髄細胞を、低血清状態で培養する工程とを含む、歯髄幹細胞の調製方法。【選択図】なし