A method for site-specific mutagenesis of a medicago sativa gene by using a CRISPR/Cas9 system. The method comprises: first constructing a universal binary expression vector MsCRISPR/Cas9 mediated and transformed by agrobacterium tumefaciens in medicago sativa； then designing a CRISPR/Cas9-based sgRNA sequence for a target gene in the medicago sativa, and connecting a DNA fragment for encoding the sgRNA sequence to MsCRISPR/Cas9 to construct a carrier MsCRISPR/Cas9::target； and then mediating and transforming the medicago sativa by using the agrobacterium tumefaciens, and obtaining, by screening, a mutant transformed plant with the target gene knocked out. According to the method, an MtU6 promoter is used for initiating sgRNA transcription in the medicago sativa.L'invention concerne une méthode de mutagenèse dirigée d'un gène de Medicago sativa à l'aide d'un système CRISPR/Cas9. La méthode comprend : tout d'abord la construction d'un vecteur d'expression binaire universel MsCRISPR/Cas9 médié et transformé par Agrobacterium tumefaciens en Medicago sativa ； puis la conception d'une séquence de sgARN basée sur CRISPR/Cas9 pour un gène cible dans Medicago sativa, et la connexion d'un fragment d'ADN pour le codage de la séquence de sgARN à MsCRISPR/Cas9 pour construire un support MsCRISPR/Cas9 : cible ； puis la médiation et la transformation du Medicago sativa à l'aide de l'Agrobacterium tumefaciens, et l'obtention, par criblage, d'une plante transformée mutante ayant le gène cible inactivé. Selon la méthode, un promoteur MtU6 est utilisé pour initier la transcription de sgARN dans le Medicago sativa.一种利用CRISPR/Cas9系统对紫花苜蓿基因定点突变的方法。首先构建紫花苜蓿中通用的由根癌农杆菌介导转化的双元表达载体MsCRISPR/Cas9；再针对紫花苜蓿中的目标基因设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，将含有编码所述sgRNA序列的DNA片段连接到MsCRISPR/Cas9中构建载体MsCRISPR/Cas9::target；然后使用根癌农杆菌介导转化紫花苜蓿，通过筛选获得目的基因被敲除的突变体转化植株。该方法使用MtU6启动子在紫花苜蓿中启动sgRNA转录。
