本发明公开了一种双重PCR检测试剂盒在非诊断非治疗性的鉴别并区分副溶血性弧菌流行菌群与非流行菌群的用途,所述检测试剂盒包括序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的直接溶血素基因检测用引物对,以及序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的不耐热溶血素检测用引物对。本发明采用了双重PCR检测试剂盒,可排除杂菌干扰,替代多个副溶血性弧菌毒力基因检测,以tlh筛查样本中是否存在副溶血性弧菌、以tdh1_368筛查样本中是否存在副溶血性弧菌“大流行菌群”,从而通过一次性扩增区分副溶血性弧菌流行群与非流行群,这有助于提高常规流行株检测的灵敏性及特异性,简便有效。