DANIEL F CARLSON,ダニエル・エフ・カールソン,SCOTT C FAHRENKRUG,スコット・シー・ファーレンクラッグ
申请号：
JP2020023018
公开号：
JP2020089386A
申请日:
2020.02.14
申请国别(地区):
JP
年份:
2020
代理人:
摘要：
To provide methods for introgressing an allele or gene into the chromosomal DNA of a non-human animal cell.SOLUTION: Provided is a method comprising introducing, to a non-human animal cell isolated from a non-human animal line, (a) CRISPR/Cas endonuclease； (b) a guide RNA (gRNA) containing a spacer RNA sequence that interacts with a target sequence in the chromosomal DNA of a non-human animal cell； and (c) a homologous recombination repair (HDR) template DNA sequence encoding an allele or gene flanked by sequences homologous to the target sequence in the chromosomal DNA of a non-human animal cell, the HDR template DNA sequence also comprising a DNA sequence that encodes a mismatch to the target sequence that modifies the interaction of gRNA with the RNA spacer sequence, the mismatch being introduced into the chromosomal DNA of the cell, and a sequence in the chromosomal DNA of the cell that is not present in the non-human animal line being formed.SELECTED DRAWING: Figure 3【課題】非ヒト動物細胞の染色体ＤＮＡ中に対立遺伝子または遺伝子を移入させるための方法を提供する。【解決手段】非ヒト動物系列から単離された非ヒト動物細胞に、（ａ）ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓエンドヌクレアーゼ；（ｂ）非ヒト動物細胞の染色体ＤＮＡにおける標的配列と相互作用するスペーサＲＮＡ配列を含むガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）；および（ｃ）非ヒト動物細胞の染色体ＤＮＡにおける標的配列と相同性の配列によってフランキングされる対立遺伝子または遺伝子をコード化する相同組換え修復（ＨＤＲ）鋳型ＤＮＡ配列を導入するステップを含み、ＨＤＲ鋳型ＤＮＡ配列は、また、ｇＲＮＡのＲＮＡスペーサ配列との相互作用を改変する標的配列に対してミスマッチをコード化するＤＮＡ配列を含み、ミスマッチが、細胞の染色体ＤＮＡ中に導入され、非ヒト動物系列に存在しない細胞の染色体ＤＮＡにおける配列を形成する、方法。【選択図】図３
