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基于毒蛋白MazF反向筛选的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法
- 专利权人:
- 江南大学
- 发明人:
- 江波,沐万孟,何伟伟,张涛
- 申请号：
- CN201510294606.5
- 公开号：
- CN104962508A
- 申请日:
- 2015.06.02
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2015
- 代理人:
- 时旭丹`张仕婷
- 摘要：
- 基于毒蛋白MazF反向筛选的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。利用载体pDGREF将毒蛋白MazF基因和抗生素抗性基因spc整合至B.subtilis 1A751染色体上，得到1A751/REF；以pDGIEF为出发载体，将梭状芽胞杆菌ATCC 35704的DPE酶基因和启动子P43构建至淀粉酶同源臂之间，得到整合载体pDGI-P43-DPE；将pDGI-P43-DPE转化至1A751/REF感受态中，在淀粉酶同源臂作用下，P43-DPE酶基因整合至1A751/REF染色体上毒蛋白MazF的位置，得到一株食品级安全的产D-阿洛酮糖3-差向异构酶重组枯草芽孢杆菌1A751-DPE，命名为枯草芽孢杆菌SK38.003，保藏号CCTCC NO: M 2015259。发酵液总酶活达到6U/mL，具有重要的工业应用价值。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
