A multistep chromatographic separation process for the recovery of a polyunsaturated fatty acid product from a mixed feed, These include: (a) the mixture of water and the first organic solvent is used to purify the mixture by chromatography in the first stage to produce intermediate products； (b) the mixture of water in the second stage is used to purify the intermediate products by chromatography. There is also a second organic solvent, which is used to produce PUFA products. The second organic solvent is different from the first organic solvent.In the first stage of chromatographic separation, it includes feeding mixture input in simulated or actual mobile bed chromatograph device, while the second stage of chromatographic separation includes intermediate product input into fixed bed chromatograph device.Referido a un proceso de separacion cromatografica de multiples etapas, para la recuperacion de un producto de acido graso poliinsaturado (PUFA) a partir de una mezcla de alimentacion, el cual comprende: (a) purificar la mezcla de alimentacion en una primera etapa de separacion cromatografica usando como eluyente una mezcla de agua y un primer disolvente organico, para obtener un producto intermedio； y (b) purificar el producto intermedio en una segunda etapa de separacion cromatografica que usa como eluyente una mezcla de agua y un segundo disolvente organico, para obtener el producto de PUFA, donde el segundo disolvente organico es diferente del primer disolvente organico； ademas, en la primera etapa de separacion cromatografica comprende introducir la mezcla de alimentacion en un aparato de cromatografia de lecho movil simulado o real y la segunda etapa de separacion cromatografica comprende introducir el producto intermedio en un aparato de cromatografia de lecho estacionario.
