FEDERALNOE GOSUDARSTVENNOE BJUDZHETNOE UCHREZHDENIE "NAUCHNO-ISSLEDOVATELSKIJ INSTITUT VAKTSIN I SYVOROTOK IM. I.I. MECHNIKOVA" ROSSIJSKOJ AKADEMIIMEDITSINSKIKH NAUK (FGBU "NIIVS IM. I.I. MECHNIKOVA"
发明人:
GRUBER IRINA MIRONOVNA,Грубер Ирина Мироновна,DONENKO FEDOR VITALEVICH,Доненко Федор Витальевич,ASTASHKINA ELENA ANDREEVNA,Асташкина Елена Андреевна,IGNATOVA OLGA MIKHAJLOVNA,Игнатова Ольга Михайловна
申请号：
RU2013141170/10
公开号：
RU0002533815C1
申请日:
2013.09.09
申请国别(地区):
RU
年份:
2014
代理人:
摘要：
FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: method provides culturing in the liquid culture medium of the virulent strain of bacteria Staphylococcus aureus No. 6 followed by separation of the culture medium from the bacteria by filtration through the filter PLASMAFILTER PLASMAFLUX PSu 2S with obtaining the filtrate. Ammonium sulphate to 80% saturation is added to the resulting filtrate to obtain the precipitate. The resulting precipitate is separated by centrifugation at 10000 g for 30 minutes and dissolved in phosphate buffer at pH 7.4 with subsequent microfiltration of the protein-containing fraction through the 0.22 mcm membrane and desalting on the column PD-10, purification and concentration by carrying out ion-exchange chromatography on the column of Q-sepharose, elution with 0.15 M NaCl and ultrafiltration on two filters of 100 and 30 kDa to obtain protein containing fraction with the molecular weight of 30-90 kDa and protein content of 0.5-1.0 mg/ml.EFFECT: invention enables to obtain the products based on protective secreted protein-containing compound.1 dwg, 5 tbl, 1 exИзобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения протективных антигенов на основе секретируемых белоксодержащих соединений Staphylococcus aureus. Способ предусматривает культивирование на жидкой питательной среде вирулентного штамма бактерий Staphylococcus aureus №6 с последующим отделением культуральной среды от бактерий путем фильтрования через фильтр PLASMAFILTER PLASMAFLUX PSu 2S с получением фильтрата. К полученному фильтрату добавляют сульфат аммония до 80% насыщения с получением осадка. Полученный осадок отделяют центрифугированием при 10000 g в течение 30 минут и растворяют в фосфатном буфере с pH 7.4 с последующей микрофильтрацией белоксодержащей фракции через мембрану 0,22 мкм и обессоливанием на колонке PD-10, очисткой и концентрированием путем проведения ион-обменной хроматографии на колонке Q-сефарозы, элюции 0,15 М NaCl и ультрафильтрацией на двух фильтрах 100
