The present Invention provides a chromatographic separation process for the Recovery of a product of polyunsaturated fatty acid (PUFA) from a mixture of food, which comprises: (a) to purify the feed mixture in a first phase of chromatographic separation used When the eluent as a mixture of water and a First Organic SolventTo obtain an intermediate product and (b) PURIFYING the intermediate in a Second Phase of chromatographic separation is used as eluent a mixture of water and a Second Organic Solvent to obtain the product of PUFA,Where the second Organic Solvent is different from the first Organic Solvent Polarity and has an index that differs from the first Organic Solvent Polarity Index of between 0.1 and 2.0, where the product of PUFA is different from Alpha Linolenic Acid (ALA), Gamma Linolenic Acid (GLA), linoleic acid, a mono -, di - or tri Wing, a mono - or di triglyceride of GLA, a mono -, di - and triglyceride of linoleic acid alkyl Ester, a C1 - C4 Wing, a c1-c4 alkyl Ester GLA or c1-c4 alkyl Ester of linoleic acid or a mixture thereofLa presente invencion proporciona un proceso de separacion cromatografica para la recuperacion de un producto de acido graso poliinsaturado (PUFA) a partir de una mezcla de alimentacion, el cual comprende: (a) purificar la mezcla de alimentacion en una primera etapa de separacion cromatografica usando como eluyente una mezcla de agua y un primer disolvente organico, para obtener un producto intermedio y (b) purificar el producto intermedio en una segunda etapa de separacion cromatografica que usa como eluyente una mezcla de agua y un segundo disolvente organico, para obtener el producto de PUFA, donde el segundo disolvente organico es diferente del primer disolvente organico y tiene un indice de polaridad que difiere del indice de polaridad del primer disolvente organico entre 0.1 y 2.0, donde el producto de PUFA es diferente de acido alfa-linolenico (ALA), acido gamma-linolenico (GLA), acido linoleico, un mono- di o triglic
