The invention provides a chromatographic separation process for recovering a polyunsaturated fatty acid product from a mixed feed, These include: (a) the mixture of water and the first organic solvent is used to purify the mixture by chromatography in the first stage to produce intermediate products； (b) the mixture of water in the second stage is used to purify the intermediate products by chromatography. The second organic solvent is used to obtain PUFA products,The second organic solvent is different from the first organic solvent. Its polarity index is different from that of the first organic solvent 0.1 to 2.0. The latter PUFA product is different from α - linolenico (pterygoid) acid,2.Acido Gamma-Linolenico（GLA），Linoleic acid, mono diene or triglyceride, mono diene or triglyceride GLA, a monkey, di or triglyceride linoleic acid, a C1-C4 linoleum mat, a C1-C4 linoleum mat, a C1-C4 linoleic acid tar mat or a mixtureLa presente invencion proporciona un proceso de separacion cromatografica para la recuperacion de un producto de acido graso poliinsaturado (PUFA) a partir de una mezcla de alimentacion, el cual comprende: (a) purificar la mezcla de alimentacion en una primera etapa de separacion cromatografica usando como eluyente una mezcla de agua y un primer disolvente organico, para obtener un producto intermedio； y (b) purificar el producto intermedio en una segunda etapa de separacion cromatografica que usa como eluyente una mezcla de agua y un segundo disolvente organico, para obtener el producto de PUFA, donde el segundo disolvente organico es diferente del primer disolvente organico y tiene un indice de polaridad que difiere del indice de polaridad del primer disolvente organico entre 0.1 y 2.0, donde el producto de PUFA es diferente de acido alfa-linolenico (ALA), acido gamma-linolenico (GLA), acido linoleico, un mono- di o triglicerido de ALA, un mono- di o triglicerido de GLA, un mono, di- o triglicerido de acido linoleico, un ester de alquilo C1-C4 de AL
