本发明提供一种青霉素酰化酶、编码基因、产生菌株及其应用,属于生物制药技术领域。青霉素酰化酶产生菌,为木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)PX01,保藏登记号为CCTCC NO:M 2015215。所述霉素酰化酶,具有如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列或与该序列具有98%以上同源性的氨基酸序列。所述青霉素酰化酶编码基因具有如SEQ ID NO:1所示的序列或与该序列具有90%以上同源性的序列。本发明还要求保护含有所述编码基因的重组载体、表达盒或重组菌以及所述酶在合成β-内酰胺类抗生素中的应用。该青霉素酰化酶具有耐高温、pH稳定性好、有机溶剂耐受性强的优点。