本发明公开了一种人工设计的青霉素G酰化酶原及编码序列和发酵方法。该青霉素G酰化酶原包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的α亚基和氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的β亚基。该酶原可以加工为成熟的青霉素G酰化酶，可用于阿莫西林等β-内酰胺类抗生素的合成。编码该酶原的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，该核苷酸序列为经过优化得到，适于大肠杆菌中进行表达。将该核苷酸序列重组于大肠杆菌表达载体上，再转化到大肠杆菌表达菌株中，使用由有机氮源、碳源和无机盐组成的发酵培养基，配合补料培养基进行发酵。通过该发酵方法得到的青霉素G酰化酶的酶活，对于组成型表达菌株能达到28000U/L，对于诱导型表达菌株能达到35000U/L。
