Provided are methods of preparing tumor antigen-specific T cells comprising enriching activated T cells from a first co-culture comprising a first population of antigen-loaded dendritic cells and a population of T cells, and co-culturing the enriched activated T cells with a second population of antigen-loaded dendritic cells. Also provided are methods of treating cancer in an individual using the tumor antigen-specific T cells, pharmaceutical compositions and kits for cell-based cancer immunotherapy.L'invention concerne des procédés de préparation de lymphocytes T spécifiques à un antigène tumoral comprenant l'enrichissement des lymphocytes T activés à partir d'une première co-culture comprenant une première population de cellules dendritiques chargées d'antigène et une population de lymphocytes T, et la co-culture des lymphocytes T activés enrichis avec une seconde population de cellules dendritiques chargées d'antigène. L'invention concerne également des méthodes de traitement du cancer chez un individu faisant appel à des lymphocytes T spécifiques à un antigène tumoral, des compositions pharmaceutiques et des kits pour une immunothérapie anticancéreuse à base de cellules.