The present invention describes a self-limiting Cas9 network (SLiCES) for improved safety, wherein SLiCES is an expression unit for Streptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9), a first Cas9 self-targeting sgRNA and selected Consists of a second sgRNA that targets the genomic locus. A self-limiting circuit by controlling the Cas9 level results in improved genome editing specificity. For its in vivo use, SLiCES was incorporated into a lentiviral delivery system (lentiSLiCES) by circuit inhibition to achieve viral particle production. Following its delivery to the target cell, the lentiSLiCES circuit is turned on to edit the intended genomic locus, while at the same time promoting its own neutralization by SpCas9 inactivation. By protecting target cells from residual nuclease activity, the hit-and-go system of the present invention increases the safety margin for genome editing.本発明は、安全性向上のための自己制限Ｃａｓ９回路網（ＳＬｉＣＥＳ）を記載し、ＳＬｉＣＥＳは、化膿性連鎖球菌Ｃａｓ９（ＳｐＣａｓ９）用の発現ユニット、第１のＣａｓ９自己標的化ｓｇＲＮＡおよび選択されたゲノム遺伝子座を標的化する第２のｓｇＲＮＡからなる。Ｃａｓ９レベルを制御することによる自己制限回路は、ゲノム編集特異性の向上をもたらす。そのインビボ利用のために、ウイルス粒子産生を達成するための回路阻害によってＳＬｉＣＥＳをレンチウイルス送達系（ｌｅｎｔｉＳＬｉＣＥＳ）に組み込んだ。標的細胞へのその送達に続いて、ｌｅｎｔｉＳＬｉＣＥＳ回路をオンにして意図するゲノム遺伝子座を編集し、それと同時にＳｐＣａｓ９不活性化によるそれ自体の中和を促進する。標的細胞を残留ヌクレアーゼ活性から保護することによって、本発明のヒットアンドゴー系はゲノム編集のための安全域を増加させる。
