NATIONAL INSTITUTE OF AGROBIOLOGICAL SCIENCES;国立研究開発法人農業生物資源研究所
发明人:
YOKOI AYAKO,横井 彩子,TOKI SEIICHI,土岐 精一
申请号：
JP2015030734
公开号：
JP2015171358A
申请日:
2015.02.19
申请国别(地区):
JP
年份:
2015
代理人:
摘要：
PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for producing a plant cell in which a target DNA is introduced only a necessary mutation, without leaving an unnecessary sequence such as a marker gene not only in the target DNA but also in regions other than the DNA.SOLUTION: The method for producing a plant cell in which a target DNA is introduced a mutation, comprises the steps of: introducing a DNA construct into a plant cell, the DNA construct including DNA homologous to the target DNA, having been inserted with a piggyBac transposon including a marker gene in the homologous DNA, and having been introduced the desired mutation； selecting a plant cell in which the mutation and the piggyBac transposon are introduced in the target DNA by homologous recombination, by making expression of the marker gene as an index； and causing the piggyBac transposase to constantly express in the cell selected by the above step and removing the piggyBac transposon from the target DNA.【課題】 標的ＤＮＡのみならず、該ＤＮＡ以外の領域にも、マーカー遺伝子等の不要な配列を残すことなく、必要な変異のみが標的ＤＮＡに導入された植物細胞の製造方法を提供すること。【解決手段】 標的ＤＮＡと相同なＤＮＡを含むＤＮＡ構築物であって、該相同ＤＮＡにマーカー遺伝子を含むｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンが挿入されており、かつ所望の変異が導入されているＤＮＡ構築物を、植物細胞に導入する工程と、前記変異及び前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンが相同組換えによって標的ＤＮＡに導入された植物細胞を、前記マーカー遺伝子の発現を指標として選択する工程と、前記工程にて選択された細胞に、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゼースを恒常的に発現させ、前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンを前記標的ＤＮＡより除去する工程とを含む、標的ＤＮＡに変異が導入された植物細胞の製造方法【選択図】 なし
