本发明公开了一种鉴别四种天南星科药用植物(天南星、半夏、虎掌、水半夏)的荧光PCR检测试剂盒及应用。鉴别四种天南星科药用植物的检测试剂盒，它包括天南星特异引物和特异探针，半夏属通用特异引物、半夏特异探针、虎掌特异探针，水半夏特异引物和特异探针，内标质控特异引物和特异探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑13所示。本发明以特异性荧光探针与模板配对，具有高度的特异性与专一性，并且扩增效率高，灵敏度高，准确率高，重现性好，检测周期短，能在1.5小时内完成检测，且能实时检测DNA扩增反应，具有很高的可行性与应用前景，可以为解决目前中药市场天南星科植物使用混乱的现象提供科学可靠的方法。
