本发明涉及基因工程药物技术领域,公开了一种增强TRAIL抗肿瘤活性的双靶点融合蛋白,全长融合基因序列1的编码cDNA序列见SEQ ID NO1;全长融合基因序列1的编码氨基酸序列见SEQ ID NO2;全长融合基因序列2的编码cDNA序列见SEQ ID NO4;全长融合基因序列2的编码氨基酸序列见SEQ ID NO5。本发明与单独TRAIL蛋白可溶性片段编码cDNA序列的原核表达载体相比,原核表达载体的融合蛋白具有更高的可溶性表达,融合蛋白的回收及纯化效率更高;体外生物活性分析表明,所获融合蛋白能同时激动细胞膜上死亡受体和抑制细胞质内XIAP基因的表达,通过凋亡途径双靶点的作用增强诱导肿瘤细胞凋亡的活性,具有更强的抗肿瘤作用。