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一种特异性抑制DCUN1D1基因的慢病毒及其构建方法和应用
- 专利权人:
- 信雅生物科技(苏州)有限公司
- 发明人:
- 宋鑫,赵留芳,孟旭东,葛春蕾
- 申请号：
- CN201711179403.7
- 公开号：
- CN109825481A
- 申请日:
- 2017.23.11
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2019
- 代理人:
- 摘要：
- 一种能够特异性抑制DCUN1D1基因的慢病毒的构建方法,其包括如下步骤:S1,干扰靶点设计和引物合成:S2,引物退火形成带粘性末端的双链片段:S3,用PCR反应合成该含有限制性内切酶识别序列及DCUN1D1基因干扰位点的序列。S4,线性化表达载体的制备:S5,将DCUN1D1的干扰片段与双酶切后的pLKD‑CMV‑eGFP‑U6‑shRNA载体进行连接,形成重组质粒:S6,将重组质粒进行感受态细胞转化、培养、筛选和测序验证,挑选出正确克隆的重组菌液;S7,用质粒提取试剂盒提取正确克隆的重组菌液中的质粒;S8,用“瑞士病毒包装系统”进行特异性抑制DCUN1D1基因表达的慢病毒的生产:S9,用Western blot验证上一步中所生产的慢病毒感染肺鳞癌细胞后DCUN1D1蛋白的表达情况。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
