This invention relates to a novel method for producing di-chain proteins for use in humans from single-chain precursors, including di-chain clostridial neurotoxins. The method comprises the step of expressing a nucleic acid sequence encoding a single-chain precursor comprising a thrombin-cleavage site and the step of cleaving the single-chain precursor with a human factor Xa or a human thrombin, particularly a human thrombin drug product authorized for human therapeutic use. The invention further relates to novel di-chain clostridial neurotoxins and nucleic acid sequences encoding such novel di-chain clostridial neurotoxins.Cette invention concerne un nouveau procédé pour produire des protéines di-chaînes pour utilisation dans des êtres humains à partir de précurseurs mono-chaînes, comprenant des neurotoxines clostridiales di-chaînes. Le procédé comprend létape dexpression dune séquence dacide nucléique codant pour un précurseur mono-chaîne comprenant un site de clivage de thrombine et létape de clivage du précurseur mono-chaîne avec un facteur humain Xa ou une thrombine humaine, en particulier un produit médicamenteux à base de thrombine humaine autorisé pour une utilisation thérapeutique humaine. Linvention concerne également de nouvelles neurotoxines clostridiales di-chaînes et séquences dacides nucléiques codant pour de telles neurotoxines clostridiales di-chaînes nouvelles.