本发明公开了一种用于检测大豆脂肪酸脱氢酶合成基因B1型突变的引物及应用,属于植物分子标记开发和作物分子辅助选择技术领域。本发明提供引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示。同时,本发明还提供了一种利用该引物快速检测大豆脂肪酸脱氢酶合成基因B1型突变位点的方法,该方法是以待测样品的DNA为模板,以如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列为引物进行PCR扩增,在对所获得的扩增产物进行酶切,最后利用电泳鉴定酶切产物。本发明所涉及的引物和酶切鉴定反应能够快速并且准确地检测控制大豆高油酸含量的B1型突变位点,本发明可以大大缩短高油酸大豆材料的筛选周期,为高油酸大豆品种的培育提供了分子标记资源。