本发明公开了一种用于检测大豆脂肪酸脱氢酶合成基因B1型突变的引物组及应用,属于植物分子标记开发和作物分子辅助选择技术领域。本发明所提供引物组的核苷酸序列表如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.5所示。同时本发明还提供了一种利用上述引物组快速检测大豆脂肪酸脱氢酶合成基因B1型突变位点的方法,该方法是以待测样品的DNA为模板,以如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所述序列为引物进行第一轮PCR扩增,稀释扩增产物后,再以稀释后的扩增产物为模板,以如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.5所述序列为引物进行第二轮PCR扩增,最后利用高分辨率熔解曲线分析仪器对第二轮扩增产物进行基因型突变检测。本发明所提供的引物和方法对于高油酸大豆的分子标记辅助选择具有重要意义。