本发明公开了一种产生PVY抗性的NteIF4E‑1基因突变体及其应用。所述的产生PVY抗性的NteIF4E‑1基因突变体,相对于核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的NteIF4E‑1基因,所述的产生PVY抗性的NteIF4E‑1基因突变体含有的NteIF4E‑1基因序列中159位的G被A取代发生了点突变,所述的产生PVY抗性的NteIF4E‑1基因突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。应用为所述的产生PVY抗性的NteIF4E‑1的基因突变体在获得具有PVY抗性的烟草植株中的应用。本发明经烤烟品种云烟87的EMS突变体创制,利用Tilling技术筛选NteIF4E‑1基因突变株,突变材料中目标突变的测序验证及NteIF4E‑1基因纯合终止突变体材料的PVY抗性分析。采用本方法获得NteIF4E‑1基因发生终止突变的烤烟材料能够抗PVY病毒。