The present invention relates to an electrochemical immunoassay cartridge, and a manufacturing method thereof enabling to finely form a plurality of passages corresponding to a passage aperture portion by having a passage guide layer where the passage aperture portions are formed independently of an insulating layer on a base where electrodes are formed. Furthermore, the present invention is to form passages to make a fluid flow smoothly without retention while there is no leakage in an electrode junction portion, and a capillary phenomenon does not occur inside a channel.본 발명은 전기화학적 면역분석 카트리지 및 이것의 제조방법에 대한 것으로, 전극이 형성된 베이스 위에 절연층과는 별도로 유로개구부가 형성된 유로가이드층을 가짐으로서 상기 유로개구부에 대응되는 다수의 유로를 미세하게 형성할 수 있는 것이며, 나아가, 전극 접합부에 누설이 없고 채널 내부에서 모세관 현상이 발생하지 않으며 유체가 정체됨이 없이 원할하게 흐를 수 있는 유로를 형성하기 위한 것이다.