本发明提供一种抗肿瘤重组质粒、基因疫苗及其用途。该重组质粒由Cyp26a1基因cDNA片段和真核表达载体pVAX1组成,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示其是通过提取并纯化大鼠妊娠子宫总RNA,设计特异性引物,采用温度降落逆转录-聚合酶链式扩增方法克隆扩增大鼠子宫Cyp26a1基因cDNA片段,并将其重组到真核表达质粒中而构建的。所制备的基因疫苗可用于制备预防和/或治疗哺乳动物乳腺癌的药物,具有安全、长效、稳定、操作便捷的优点,能同时高效激发体液免疫和细胞免疫,比其它免疫手段免疫效力更强,所需的免疫量较小,具有有效抑制肿瘤生长和迁移的作用。