本发明公开了一种玉米黄质合成基因重组表达质粒pET-Zea,其碱基序列如SEQ ID NO:1所示。同时本发明还公开了pET-Zea的制备方法及其在检测目标受体玉米黄质合成基因活性中的应用和应用方法。本发明所提供的玉米黄质合成基因重组表达质粒pET-Zea,在导入大肠杆菌BL21菌株后,成功地实现了玉米黄质在大肠杆菌细胞体内的积累,由此可准确快速构建玉米黄质生产菌株。本发明所提供的制备玉米黄质合成基因重组表达质粒pET-Zea的方法简便、易操作、成本低。本发明方法可以通过酶切、连接,将目标受体中待检测的基因序列替换重组表达质粒pET-Zea中的相关基因序列,然后通过检测宿主细胞体内是否积累玉米黄质即可简单、有效地对目标受体中待测基因功能进行检测和验证。