本发明涉及一种番木瓜环斑病毒基因及其RNAi表达载体的构建方法,所述番木瓜环斑病毒基因为CP、Hc-Pro、NIb基因,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列;以感染番木瓜环斑病毒番木瓜叶片为材料,提取总RNA,反转录为cDNA,以CP、Hc-Pro、NIb为靶标干扰基因的保守区域,通过遗传转化,分别将其构建成高效、稳定抗病毒植物表达载体,从而得到具有抗病毒植株。本发明利用CP、NIb、Hc-Pro基因片断保守序列构建RNAi表达载体,并且将RNAi的高效抗病设计理念引入到番木瓜的抗病基因工程育种中,可用于创造高效、广谱抗PRSV病毒病的新种质。