本发明公开了一种猪INF‑γ的优化基因和采用该优化基因制备猪INF‑γ的方法及其注射液和应用,所述猪INF‑γ的优化基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示,所述制备方法包括:1)将权利要求1所述的基因序列克隆到真核表达载体中,得到重组真核表达载体;2)将步骤1)中所述重组真核表达载体转染CHO细胞,通过培养、筛选和驯化,得到高效表达猪INF‑γ的CHO细胞株;以及3)将步骤2)中所述CHO细胞株进行发酵培养,从发酵培养上清中纯化得到猪INF‑γ。所述注射液包括60μg猪INF‑γ与70佐剂。使用优化后的基因序列在CHO细胞中制备猪INF‑γ蛋白时具有产量高、易纯化、成本低、质控容易,且具有良好的活性,可以作为免疫增强剂和治疗药品使用。