本发明公开了一种肿瘤抑制因子p16的抗原多肽和其应用。本发明肿瘤抑制因子p16的抗原多肽的多肽活性片段为下列至少一种氨基酸序列:(1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列;(2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经缺失、插入或替换所获得的具有相同功能的氨基酸序列。本发明抗原多肽可以在制备检测血样品中p16自身抗体水平的试剂盒中的应用。本发明抗原多肽具有的特定抗原决定簇,从而提高了本发明抗原多肽与待测样本中所含的肿瘤抑制因子p16的自身抗体之间的特异结合率,提高了检查的灵敏度高和检测效率,从而能够准确预测早期肿瘤的危险性,并为肿瘤新药研究提供可靠数据。