The present application provides a lentiviral vector used for the treatment of hemophilia B, lentivirus, and preparation method and application thereof, wherein the lentiviral vector may be obtained by applying pTYF or modifying a pTYF lentiviral vector at the 5'-end splice donor site and further comprises a FIX gene. The FIX gene is specifically connected into the pTYF or the modified lentiviral vector of the present invention, thereby achieving a more efficient gene delivery while ensuring safety, significantly increasing the expression level of the FIX gene in bone marrow-related cells, and more efficiently accomplishing the transfer of normal genes during the gene therapy of hemophilia B.La présente invention concerne un vecteur lentiviral utilisé pour le traitement de l'hémophilie B, un lentivirus, et son procédé de préparation et une application associée, le vecteur lentiviral pouvant être obtenu par l'application de pTYF ou la modification d'un vecteur lentiviral pTYF au niveau du site donneur d'épissage d'extrémité 5' et celui-ci comprenant en outre un gène FIX. Le gène FIX est relié spécifiquement au pTYF ou au vecteur lentiviral modifié selon la présente invention, ce qui permet d'obtenir une administration de gène plus efficace tout en garantissant une sécurité, une augmentation significative du niveau d'expression du gène FIX dans des cellules liées à la moelle osseuse, et un accomplissement plus efficace du transfert de gènes normaux pendant la thérapie génique de l'hémophilie B.