本发明涉及一种输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体、构建方法及用途。所述输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体,由含纳豆激酶基因的NK‑2A‑eGFP基因片段插入慢病毒RNA干扰载体中获得,所述含纳豆激酶基因的NK‑2A‑eGFP基因片段序列如SEQ ID No.1所示。本发明构建了含有卵清蛋白启动子OV2基因与雌激素反应元件ERE和纳豆激酶的重组慢病毒表达载体,实现了纳豆激酶和绿色荧光蛋白双基因的表达,以绿色荧光蛋白EGFP作为报告基因,可以用现有的EGFP或者FITC的滤光装置检测。为利用卵清蛋白启动子OV2研究外源基因在禽类输卵管组织细胞中特异表达提供了参考依据。同时为利用鸡卵清蛋白启动子构建输卵管生物反应器来生成药物蛋白奠定了理论和物质基础。