The present invention relates to a production method of a Lentinus edodes culture. Specifically, the present invention relates to a production method of a Lentinus edodes culture which comprises the following steps: inserting a solid medium into a large opening bottle; inoculating and culturing liquid spawns; separating the solid medium from the bottle; and inserting the medium into a bag for culturing.본 발명은 표고버섯 배양물 제조방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 고체배지를 광구병에 입병하고 액체종균을 접종 및 배양한 후 상기 고체배지를 탈병하고 다시 봉지에 입봉하여 배양하는 것을 특징으로 하는 표고버섯 배양물 제조방법에 관한 것이다.