本发明属于基因工程和酶工程技术领域,具体内容涉及一种热稳定性改良的木聚糖酶XynAS9-m突变体D185P/S186E和V81P/G82E/D185P/S186E及其基因和应用。将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的木聚糖酶的第185位的天冬氨酸突变为脯氨酸且第186位的丝氨酸突变为谷氨酸获得突变体,进一步将第81位缬氨酸突变为脯氨酸,第82位甘氨酸突变为谷氨酸,第185位的天冬氨酸突变为脯氨酸且第186位的丝氨酸突变为谷氨酸获得突变体V81P/G82E/D185P/S186E。本发明的两个突变酶的热稳定性明显提高,最适温度较70℃分别提高了10℃和20℃,Tm值分别提高了1.2℃和6.99℃,显示出了在纸浆酿造、生物能源等工业上潜在的应用价值。