本发明涉及生物医药工程技术领域,提供了一种携带SIKE基因的溶瘤痘苗病毒、构建方法及应用,该SIKE基因的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。重组溶瘤痘苗病毒的构建方法包括两个步骤:(A)将SIKE的基因序列通过Xba I和Bgl II位点插入pCB质粒,获得pCB‑SIKE质粒;(B)pCB‑SIKE质粒和痘苗病毒通过在细胞内的重组,经筛选和鉴定后,获得携带SIKE基因的溶瘤痘苗病毒。通过实验证实,本发明的溶瘤痘苗病毒oncoVV‑SIKE不仅对肝癌细胞、乳腺癌细胞或胶质瘤细胞等多种肿瘤细胞的药物体外抑制效果显著,且呈剂量依赖,而且病毒复制水平显著提高,同时对肿瘤动物模型也具有显著的治疗效果。因此本发明可用于制备抗肿瘤的病毒药物,为肿瘤的病毒治疗提供了新的靶点,具备广阔的临床应用前景。