PROBLEM TO BE SOLVED: To provide novel methods for preparing active acrosin to contribute expansion or promotion of acrosin utilization.SOLUTION: Disclosed herein is a method for preparing an active recombinant acrosin, the method comprising: a step to express a gene encoding an acrosin comprising a trypsin domain but not C terminal hydrophobic region in an eukaryotic cell; and a step to cause self-activation of the recombinant acrosin expressed and secreted in the culture medium in the above step in the presence of a protease inhibitor that reversibly or transiently inhibits acrosin.SELECTED DRAWING: NoneCOPYRIGHT: (C)2020,JPO&INPIT【課題】活性型のアクロシンの新規調製方法を提供し、アクロシンの利用の拡大ないし促進に貢献することを課題とする。【解決手段】トリプシンドメインを含み、且つC末端疎水領域を含まないアクロシンをコードする遺伝子を真核細胞内で発現させるステップ、及び当該ステップによって培地中に分泌発現された組換えアクロシンを、アクロシンに対して可逆的ないし一過性阻害作用を示すプロテアーゼ阻害剤の存在下で自己活性化させるステップ、を含む、活性型組換えアクロシンの調製方法が提供される。【選択図】なし