本发明提供了一种重组人朊蛋白hPrP及其制备方法和应用,该重组hPrP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明以人全血基因为模板,以SEQ ID No3、4所示核苷酸序列为引物通过PCR方法获得带有酶切位点的人朊蛋白DNA序列,将其连接到pPROEX-htb质粒上,通过定点突变技术除去表达载体中目的基因之前的多余酶切位点,获得hPrP全真表达载体。将该载体在大肠杆菌中表达、过高亲和力层析柱纯化、复性,得到了重组人朊蛋白。本发明所得到的重组人朊蛋白hPrP具有较好的生物活性,可用于开发人朊蛋白多克隆抗体、单克隆抗体以及针对人的朊病毒病诊断试剂盒。