本发明提供了一种重组牛朊蛋白bPrP及其制备方法和应用，bPrP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明以牛全血基因为模板，以SEQ IDNo3、4所示核苷酸序列为引物通过PCR方法获得带有酶切位点的牛朊蛋白DNA序列，将其连接到pPROEX-htb质粒上，通过定点突变技术除去表达载体中目的基因之前的多余酶切位点，获得bPrP全真表达载体。将该载体在大肠杆菌中表达，过高亲和力层析柱纯化、复性，得到了和天然prion蛋白具有相同构象的重组朊蛋白。本发明所得到的牛朊蛋白氨基酸序列与天然牛朊蛋白高度相似（仅N端多了一个甘氨酸），可用于开发牛朊蛋白单克隆抗体、对牛的朊病毒病诊断试剂盒用。
