There is disclosed an improved, safer and commercially efficient process for developing genetically engineered cells. More specifically, there is disclosed a process comprises introducing a donor DNA construct, a guide RNA, and an RNA-guided nuclease with the host cells to be transfected； and introducing the three components into the host cell. There is further disclosed a donor DNA construct designed for inserting a CAR (chimeric antigen receptor) into a defined genomic site of a host cell. Further, the present disclosure provides a host cell transfected with a CAR that lacks viral vectors that can present a safety concern. The disclosure provides for more efficient and more cost-effective process for engineering T cells to express CAR constructs.Un procédé amélioré, plus sûr et commercialement efficace pour développer des cellules génétiquement modifiées, est divulgué. Plus spécifiquement, un procédé comprenant l'introduction d'une construction d'ADN donneur, d'un ARN guide et d'une nucléase guidée par ARN avec les cellules hôtes à transfecter, et l'introduction des trois composants dans la cellule hôte, est divulgué. Une construction d'ADN donneur conçue pour insérer un CAR (récepteur antigénique chimérique) dans un site génomique défini d'une cellule hôte, est également divulguée. En outre, la présente divulgation concerne une cellule hôte transfectée avec un CAR exempt de vecteurs viraux pouvant poser un problème de sécurité. La divulgation concerne un procédé plus efficace et plus rentable pour l'ingénierie de cellules T pour exprimer des constructions CAR.
