A disposable calibration imaging reference and methods for use in facilitating hyperspectral imaging acquisition and analysis. The imaging reference possesses sharp features or patterns for auto-focus and alignment. The disposable quality of the imaging reference prevents contamination. All of its features aid in providing quality control and safety. A camera and methods for use in hyperspectral imaging for detecting misalignment of imaging reference or contamination of subject is used for acquiring spectral imaging. A hyperspectral imaging acquisition and calibration system including a camera, sensor, display, and computer for applying algorithms to the hyperspectral camera to register and process the disposable calibration imaging reference.Linvention concerne une référence détalonnage dimagerie à usage unique, et des procédés dutilisation qui facilitent lacquisition et lanalyse dans limagerie hyperspectrale. La référence dimagerie comporte des caractéristiques ou des motifs distincts pour la mise au point automatique et lalignement. Lusage unique de la référence dimagerie permet de prévenir toute contamination. Toutes les caractéristiques contribuent à assurer un contrôle de la qualité et la sécurité du système. Une caméra et des procédés utiles dans limagerie hyperspectrale pour détecter un défaut dalignement de la référence dimagerie ou une contamination du sujet, sont utilisés pour acquérir des données dimagerie spectrale. Linvention concerne un système dacquisition et détalonnage dimagerie hyperspectrale comprenant une caméra, un capteur, un écran et un ordinateur, qui applique des algorithmes à la caméra hyperspectrale afin daligner et de traiter la référence dimagerie à usage unique.