本发明提供了一种花生叶源愈伤组织Arahy7F1JQP基因启动子、重组表达载体及其制备方法,该启动子的核苷酸序列选自下述情况之一:(a),为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;(b),能与(a)中的核苷酸序列杂交并且具有相同功能的核苷酸序列;(c),与(a)或者(b)的核苷酸序列具有90%以上同源性,并且具有启动子功能的核苷酸序列。其制备方式包括提取花生基因组DNA、PCR扩增以及产物筛选三个过程。该启动子能够驱动GUS基因在花生叶源愈伤组织中高效表达。通过基因枪介导瞬时转化花生叶源愈伤组织实验证明,该启动子在花生叶源愈伤中高强度驱动GUS标记基因的表达,说明Arahy7F1JQP启动子在花生叶源愈伤中高表达,进而驱动目的基因高表达,可作为花生改良的工具。