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一种喇叭虫RNA干扰表达载体与构建方法及其应用
- 专利权人:
- 中国科学院水生生物研究所
- 发明人:
- 韦薇,柴小翠,张巨源,缪炜,张承才
- 申请号：
- CN202010434356.1
- 公开号：
- CN111471685B
- 申请日:
- 2020.05.21
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2021
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一种喇叭虫RNA干扰表达载体与构建方法及其应用。步骤包括：1)利用质粒pSCTGA的已知序列，获得pSCTGA质粒骨架；2)利用集胞藻PCC6803基因组DNA，通过PCR扩增C‑藻蓝蛋白β亚基的启动子；3)利用质粒L4440，通过PCR扩增质粒的多克隆位点；4)利用PCR扩增获得的DNA片段，通过同源重组的融合PCR和一步克隆法最终构建得到RNAi表达载体pSCT3C。本发明首先利用氯化钙法将含有目的基因的RNAi表达载体转染进大肠杆菌DH10B菌株，然后再采用接合转移方法将其转染进集胞藻PCC6803中，成功获得阳性单克隆藻株后，可通过喂食方式用于干扰天蓝喇叭虫中目的基因的表达。综上所述，本发明方法易行，操作方便，具有应用于其他纤毛虫基因干扰的可行性。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
