Providing a method that can be separated without using a silver compound even if a compound having a double bond is present in the same manner as the target cyclic macrolide compound. A method for separating a cyclic macrolide compound from the mixture, which comprises subjecting a mixture containing a cyclic macrolide compound and one or more related compounds to silica gel column chromatography immobilized with an asymmetric identifier.銀化合物を使用することなく、目的環状マクロライド系化合物と同様に二重結合を有する化合物が混在していても分離できる方法の提供。 環状マクロライド系化合物及び1種以上のその類縁化合物を含有する混合物を、不斉識別剤固定化シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付すことを特徴とする該混合物から環状マクロライド系化合物の分離方法。