本发明提供了一种实时荧光定量PCR检测猕猴桃溃疡病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的特异性引物,其由正向引物和反向引物组成,所述正向引物为:5'‑TAGGGAGTATTGGAGGAGAACCG‑3',如SEQ ID NO.1所示,所述反向引物为:5'‑TGCATAGGAGCTCACTTGGTATG‑3',如SEQ ID NO.2所示;利用所述特异性引物进行实时荧光RT‑PCR检测比进行PCR检测的灵敏度至少提高100倍。本发明还提供基于该特异性引物的试剂盒、检测方法和应用。