本发明公开了一种番茄斑驳花叶病毒实时荧光定量PCR检测方法。本发明提供了用于检测番茄斑驳花叶病毒的引物对,为如下任一:a1)由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对;a2)由将SEQ ID No.1和SEQ ID No.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的两条单链DNA分子组成的,且与a1)中所述引物对功能相同的引物对。本发明提供的番茄斑驳花叶病毒荧光定量PCR检测方法操作方便,快速,特异性强,灵敏度高;并且可以直接对田间番茄斑驳花叶病毒进行定量监测,为病害的早期预测预报提供良好的基础。因此,该方法适合于在植物病害诊断领域广泛推广应用。