THE BOARD OF TRUSTEES OF THE LELAND STANFORD JUNIOR UNIVERSITY
发明人:
DAVIS, Mark M.,HUANG, Jun
申请号：
USUS2016/042341
公开号：
WO2017/015064A1
申请日:
2016.07.14
申请国别(地区):
WO
年份:
2017
代理人:
摘要：
Methods and compositions are provided for labeling cells according to the specificity of a receptor of interes by contacting with a multimeric binding reagent. The multimeric binding reagent is based on a "tetrameric scaffold protein", which tetrameric scaffold protein has little or no affinity for biotin, and which comprises a C-terminal cysteine residue on one or more, usually all four of the polypeptides in the tetramer. The scaffold protein is modified by biotinylation at the terminal cysteines, to provide the central portion of the multimeric binding reagent. The biotinylated tetramer is combined with a high affinity biotin-binding protein tetramer. The complex thus generated has unfilled biotin-binding sites that can accommodate up to twelve biotin-tagged specific binding reagents, and is useful in various affinity selection and detection formats.Linvention concerne des procédés et des compositions de marquage de cellules en fonction de la spécificité dun récepteur dintérêt par mise en contact avec un réactif de liaison multimère. Le réactif de liaison multimère est basé sur une « protéine déchafaudage tétramère », laquelle protéine déchafaudage tétramère présente peu ou pas daffinité pour la biotine, et qui comprend un résidu de cystéine à terminaison C sur un ou plusieurs, généralement sur les quatre polypeptides dans le tétramère. La protéine déchafaudage est modifiée par biotinylation au niveau des cystéines terminales, afin de fournir la partie centrale du réactif de liaison multimère. Le tétramère biotinylé est combiné avec un tétramère de protéine de liaison à grande affinité pour la biotine. Le complexe ainsi produit possède des sites de liaison à la biotine vides pouvant recevoir jusquà douze réactifs de liaison spécifiques marqués à la biotine, et est utile dans divers formats de détection et de sélection daffinité.
