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PROCÉDÉ D'ÉLABORATION D'UN MODÈLE ANIMAL POUR LA MUCOPOLYSACCHARIDOSE DE TYPE II, ET SES APPLICATIONS
专利权人:
陕西慧康生物科技有限责任公司;SHAANXI HUIKANG BIO-TECH CO., LTD; LTD;SHAANXI HUIKANG BIO-TECH CO.
发明人:
GAO, En,高恩,HOU, Zengmiao,侯增淼,LI, Xiaoying,李晓颖,LI, Min,李敏,YANG, Xiaolin,杨小琳,ZHAO, Jinli,赵金礼
申请号:
CNCN2017/075127
公开号:
WO2018/045727A1
申请日:
2017.02.28
申请国别(地区):
CN
年份:
2018
代理人:
摘要:
Provided is a method for constructing an animal model for mucopolysaccharidosis type II, comprising: designing a target for a mouse IDS gene, synthesizing an oligonucleotide chain, and bonding the synthesized oligonucleotide chain to a pUC57-T7-sgRNA plasmid through annealing, obtaining an sgRNA expression vector; obtaining a fertilized mouse egg; thoroughly mixing transcribed Cas9 mRNA and sgRNA to obtain an RNA mixture, microinjecting the RNA mixture into the cytoplasm of the fertilized mouse egg, and implanting a surviving fertilized egg into a female mouse, breeding an F0-generation mouse; extracting genomic DNA of the F0-generation mouse and, using the genomic DNA as a template, performing a PCR reaction and enzyme digestion, and selecting a mutant mouse, thereby determining a Founder mouse; mating the Founder mouse with a wild-type male mouse to obtain an F1-generation mouse. Also provided are an animal model constructed via the present method, and applications of said model in mucopolysaccharidosis type II research.L'invention concerne un procédé d'élaboration d'un modèle animal pour la mucopolysaccharidose de type II, comprenant : la conception d'une cible pour un gène IDS de souris, la synthèse d'une chaîne oligonucléotidique et la liaison de la chaîne oligonucléotidique synthétisée à un plasmide pUC57-T7-sgARN par hybridation, ce qui permet l'obtention d'un vecteur d'expression de sgARN ; l'obtention d'un œuf de souris fécondé ; le mélange intime de l'ARNm Cas9 transcrit et du sgARN pour obtenir un mélange d'ARN, la microinjection du mélange d'ARN dans le cytoplasme de l'œuf de souris fécondé et l'implantation d'un œuf fécondé survivant chez une souris femelle, ce qui permet l'obtention d'une souris de génération F0 ; l'extraction d'ADN génomique de la souris de génération F0 et, en utilisant l'ADN génomique en tant que matrice, la mise en œuvre d'une réaction de PCR et d'une digestion enzymatique, et la sélection d'une souris mutante, ce qui permet de déf
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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