Disclosed is a method for production of recombinant human alpha-galactosidase A (rh alpha-Gal A) in a large scale, with a high purity. The method comprises the steps of (a) culturing rh alpha-Gal A-producing mammalian cells in a serum-free medium, (b) collecting culture supernatant, (c) subjecting the culture supernatant to anion-exchange column chromatography, (d) to hydrophobic column chromatography, (e) to a column chromatography employing as solid phase a material having affinity for phosphate group, (f) to cation-exchange column chromatography, (g) to dye-affinity column chromatography, and (h) to gel filtration column chromatography, in the order.L'invention concerne un procédé de production à grande échelle d'alpha-galactosidase A recombinante humaine (rh alpha-Gal A) de pureté élevée. Le procédé comprend les étapes consistant (a) à cultiver des cellules de mammifère produisant la rh alpha-Gal A en milieu sans sérum, (b) à recueillir le surnageant de culture, (c) à soumettre le surnageant de culture à une chromatographie sur colonne à échange d'anions, (d) à une chromatographie sur colonne d'interaction hydrophobe, (e) à une chromatographie sur colonne utilisant en tant que phase solide un matériau ayant une affinité pour le groupement phosphate, (f) à une chromatographie sur colonne à échange de cations, (g) à une chromatographie sur colonne d'affinité sur colorant, et (h) à une chromatographie sur colonne de filtration sur gel, dans cet ordre.
