The present invention relates to a hyaluronic acid polymer nanohydrogel and a preparation method thereof. The hyaluronic acid polymer nanohydrogel has excellent in-vivo stability, specifically exhibits fluorescence according to the activity of hyaluronidase, and is sealed with the indocyanine green to be used to monitor the in-vivo activity of the hyaluronidase. According to the present invention, the nanohydrogel formed of the self-crosslinked hyaluronic acid polymer can solve the problems of the conventional hyaluronidase detection methods to be difficult to be measured in the presence of serum, and take a long time. The present invention can selectively and quickly detect the hyaluronidase enzymes in few minutes in vivo or in the presence of serum based on a fluorescence signal.COPYRIGHT KIPO 2015본 발명은 생체내 안정성이 매우 우수하고, 히알루로니다제의 활성에 따라 특이적으로 형광을 나타낼 수 있는 인도시아닌그린이 봉입되어 히알루로니다제의 생체내 활성 모니터링을 위하여 이용될 수 있는 히알루론산 중합체 나노하이드로젤 및 그의 제조방법에 관한 것이다.본 발명에 따른 자가 교차결합된 히알루론산 중합체로 이루어진 나노하이드로젤을 사용하면, 기존의 히알루로니다제 검출 방법이 혈청 존재 하에서 측정이 힘들고, 시간이 수 시간 이상으로 오래 걸린다는 단점을 극복할 수 있으며, 형광 신호를 기반으로 생체내의 혹은 혈청 존재 하에서 히알루로니다제 효소만 선택적으로 수 분 내로 빠르게 검출할 수 있는 효과가 있다.