本发明公开了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶,它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea)的玉米赤霉烯酮水解酶中制造单个氨基酸取代而产生的、对胰蛋白酶抗性更强的酶,所述的氨基酸取代是第262位的取代。本发明通过蛋白质工程技术对野生型玉米赤霉烯酮水解酶分子内的关键氨基酸残基进行了改造,提供了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶突变体,该酶对胰蛋白酶的抗性半衰期比野生型玉米赤霉烯酮水解酶延长了20.8%,其他酶学性质与野生型玉米赤霉烯酮水解酶基本一致。