本发明公开了一种来源于葡萄藤伯克氏菌的酰胺酶、基因、菌株及其应用,所述重组酰胺酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示;所述的应用以含重组酰胺酶编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体分离纯化制备的纯酶为催化剂,以3,3,3‑三氟‑2‑羟基‑2‑甲基丙酰胺为底物,以pH为7~10的缓冲液为反应介质构成转化体系,在60‑80℃条件下进行转化反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得(R)‑3,3,3‑三氟‑2‑羟基‑2‑甲基丙酸。本发明底物浓度为200g/L,酶活为753.5U/mg(Co2+存在条件下),与已报道的酰胺酶相比,其底物浓度提高了2倍,酶活提高了近400倍。