SEYEDSAYAMDOST, Mohammad R.,XU, Fei,MOON, Kyuho,NAZARI, Behnam
申请号：
USUS2018/032340
公开号：
WO2018/209249A2
申请日:
2018.05.11
申请国别(地区):
US
年份:
2018
代理人:
摘要：
Disclosed is a high-throughput transcriptional assay format in Actinomycete bacteria, and Streptomyces spp. in particular, that leverages eGFP, inserted both at a neutral site and inside the biosynthetic cluster of interest, as a read-out for secondary metabolite synthesis. Using this approach, a silent gene cluster in Streptomyces albus J1074 was induced. The cytotoxins etoposide and ivermectin were revealed as potent inducers, allowing the isolation and structural characterization of nearly 20 novel small molecule products of the chosen cluster. One of these molecules is a novel antifungal, while several others inhibit a cysteine protease implicated in cancer. Studies addressing the mechanism of induction by the two elicitors led to the identification of a pathway-specific transcriptional repressor that silences the gene cluster under normal growth conditions. The successful implementation of this approach will allow future discovery of cryptic metabolites with useful bioactivities from Actinomycete bacteria.L'invention concerne un format d'essai de transcription à haut rendement chez des bactéries Actinomycètes, et Streptomyces spp., en particulier, qui tire parti de l'eGFP, insérée à la fois dans un site neutre et dans le groupe biosynthétique d'intérêt, à titre de lecture pour la synthèse de métabolites secondaires. Cette approche a permis d'induire un groupe de gènes silencieux chez Streptomyces albus J1074. Les cytotoxines étoposide et ivermectine se sont révélées être de puissants inducteurs, permettant l'isolement et la caractérisation structurale de pratiquement 20 nouveaux produits à petites molécules du groupe choisi. L'une de ces molécules est un nouvel antifongique, tandis que plusieurs autres inhibent une cystéine protéase impliquée dans le cancer. Des études portant sur le mécanisme d'induction par les deux éliciteurs ont conduit à l'identification d'un répresseur de transcription spécifique de la voie qui réduit le groupe de gènes au silence dans de
