INSTITUTO DE BIOLOGIA EXPERIMENTAL E TECNOLÓGICA (IBET)
发明人:
DE CARVALHO PEREIRA, Paulo,OLIVEIRA FERREIRA, João Vasco,ROSA SOARES, Ana Margarida
申请号：
IBIB2020/051341
公开号：
WO2020/170129A1
申请日:
2020.02.18
申请国别(地区):
IB
年份:
2020
代理人:
摘要：
The present invention relates to a method to selectively load molecules into exosomes in living cells. The method is based on the addition of a selected sequence of amino acids acting as targeting-peptide to a bioactive molecule.The present invention allows the expression and loading of proteins of virtually any kind irrespective of size, charge and conformation into exosomes even during exosome biogenesis. Therefore, it is possible to integrate DNA sequences of the fusion protein into the cells genome thus creating a stable cell line that can be clonally expanded and even stored for future use and to express, at the same time, multiple proteins targeted for exosomes in the same cell line, creating, in a single exosome isolation step, a multi-targeting exosome pack, allowing for more complex therapeutic approaches.The loaded exosomes can be used in therapies based in exosome engineering and delivery to selected cells or tissues in the organism.La présente invention concerne un procédé pour charger sélectivement des molécules dans des exosomes chez des cellules vivantes. Le procédé repose sur l'addition d'une séquence sélectionnée d'acides aminés agissant en tant que peptide de ciblage sur une molécule bioactive. La présente invention permet l'expression et le chargement de protéines de quasiment n'importe quel type indépendamment de la taille, de la charge et de la conformation en exosomes, même pendant la biogenèse des exosomes. Par conséquent, il est possible d'intégrer des séquences ADN d'une protéine de fusion dans le génome de cellules, créant ainsi une lignée cellulaire stable qui peut être étendue par clonage et même stockée pour un usage ultérieur, et d'exprimer, en même temps, de multiples protéines ciblées pour des exosomes dans la même lignée cellulaire, créant en une seule étape d'isolement d'exosomes, un paquet d'exosomes à ciblage multiple, permettant ainsi des approches thérapeutique plus complexe. Les exosomes chargés peuvent être utilisés pour des t
